01 納米抗體磁珠簡介 

納米抗體（Nanobody，Nb）是一類源自駱駝科動物（如駱駝、羊駝）的單域抗體片段，核心特征是僅由重鏈可變區（VHH）構成，無輕鏈結構。關鍵特點包括：

（1）分子量極小：僅15 kDa，約為傳統抗體的1/10；

（2）特異性強：抗原結合位點與傳統抗體相當，能精準識別目標分子（如蛋白、抗原表位）；

（3）穩定性高：耐酸堿、耐高溫、抗蛋白酶降解，在復雜環境（如生物樣本、工業反應體系）中仍能保持活性；

（4）易生產與改造：可通過基因工程在細胞中大量表達。

磁珠是一種具有超順磁性的微小球體，由磁性內核（通常為鐵的衍生物）、生物相容性外殼以及表面偶聯的各種功能配體組成。這種獨特結構使磁珠在外加磁場作用下表現出弱磁性，便于快速吸附分離，而撤去磁場后自身就不再帶有磁性，可輕松重懸分散。

將納米抗體（分子量小、特異性強）偶聯到磁性微球表面形成的復合物，主要用于靶向捕獲、分離生物樣本中的特定分子（如蛋白、抗原）。

（1）免疫沉淀 (IP)：免疫共沉淀（CoIP）、RNA結合蛋白免疫共沉淀（RIP）、染色質免疫共沉淀（ChIP），捕獲樣本中與目標蛋白相互作用的蛋白或核酸復合物，研究大分子間的相互作用；
（2）蛋白純化：從復雜樣本中特異性捕獲目標蛋白（如酶、抗原、重組蛋白）；
（3）外泌體分離：靶向結合外泌體表面標志物 (CD63、CD81等)，從復雜樣本中捕獲外泌體；
（4）細胞分離：靶向結合某些細胞表面的特異性標志物 (如CD分子、腫瘤抗原)，分離標記的細胞。

（1）納米抗體分子量小、且常用種屬（小鼠、兔、大鼠、羊等）的二抗無法識別，因此納米抗體磁珠可以完全避免IP時的抗體輕重鏈污染問題；

（2）納米抗體與磁珠的結合效率更高，親和力和特異性更強；

（3）穩定性好（耐酸堿/高溫），分別在4℃和40℃的情況下保存7天后進行檢測，IP效果不會受明顯的影響。

相比傳統抗體磁珠更少，但仍可能存在。減少方法：①優化洗滌液的離子強度（如調整NaCl濃度）；②控制孵育時間和溫度（避免過度結合）；③減少蛋白的量或降低蛋白濃度。

低速離心不會損壞，但高速可能導致磁珠聚團。建議轉速≤800 g，離心時間1-2 min，僅在需要快速收集磁珠時使用（優先推薦用磁性分離架，避免離心對磁珠的潛在影響）。

低濃度EDTA（如≤5 mM）通常無影響，若濃度過高（如＞10 mM），可能會影響磁珠穩定性或納米抗體與抗原的結合效率，建議提前用透析或稀釋方式降低EDTA濃度。

Q4 實驗中發現磁珠出現聚團，是什么原因？該怎么處理？

常見原因包括冷凍、干燥、結合蛋白過量或緩沖液離子強度異常。  處理方法：①若未完全聚團，可加入少量緩沖液，輕輕吹打至分散；②減少蛋白加入量或進行適量稀釋；③若聚團嚴重，建議更換新的磁珠，避免影響結合效率。

Q5 延長磁珠與樣本的孵育時間，會提高結合效率嗎？

延長時間可能會提高結合效率，但是也有可能增加非特異性吸附。  若樣本中目標蛋白豐度極低，可延長到4 h至過夜，但需同時增加洗滌次數，減少雜蛋白吸附；延長至4小時以上時，需預實驗驗證結合效率與非特異性吸附的平衡。

  04 磁珠儲存  

輝駿生物生產的納米抗體磁珠在出廠前均做過穩定性測試，37℃烘箱中放置7天，不影響磁珠效果，所以物流或短期室溫放置不影響使用，常規保存需放置4℃冰箱，但應避免冷凍。

低濃度EDTA（如≤5 mM）通常無影響，若濃度過高（如＞10 mM），可能會影響磁珠穩定性或納米抗體與抗原的結合效率，建議提前用透析或稀釋方式降低EDTA濃度。

Q4 實驗中發現磁珠出現聚團，是什么原因？該怎么處理？

正常儲存和使用下，脫落率極低（因為其為共價鍵偶聯結合）。驗證方法：①取少量磁珠溶液離心，檢測上清中是否有游離抗體（如用ELISA、SDS-PAGE）；②多次洗滌后，測試磁珠的結合效率是否下降。

  05 納米抗體偶聯磁珠  

如果您在使用納米抗體磁珠上還有疑問，歡迎咨詢我們的技術人員。輝駿生物還提供各種類型蛋白互作試劑盒以及互作實驗服務（RIP、RNA pull down、ChIP、DNA pull down、IP實驗），可根據實驗需求定進行選擇，助力您的科研更高效、更精準！