免疫共沉淀（Co-IP）* 實驗原理
結合了抗體的磁珠或樹脂（Beads）與樣本裂解液孵育，通過”抗原-抗體“之間的免疫作用，誘餌蛋白被吸附在Beads上，與此同時，誘餌蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗滌去掉未結合的蛋白后，再用洗脫緩沖液將互作蛋白復合物從Beads上洗脫下來，得到免疫共沉淀（Co-IP）產物。Co-IP產物既可以用Western Blot檢測已知蛋白，也可以用質譜鑒定未知蛋白。
當沒有合適的誘餌蛋白抗體時，還可以通過表達融合了Flag標簽的誘餌蛋白，利用Flag標簽抗體做免疫沉淀。即樣本過表達Flag-Bait，經裂解后與anti-Flag珠子孵育，誘餌融合蛋白與Beads結合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再經洗滌、洗脫后，用WB或質譜檢測。
CoIP實驗原理+實操+結果解讀+文獻解析—輝駿生物CoIP視頻全攻略
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免疫共沉淀（Co-IP）* 實驗流程
內源蛋白抗體免疫共沉淀CoIP實驗步驟
標簽抗體免疫共沉淀CoIP實驗流程
免疫共沉淀（Co-IP）* 應用背景
蛋白質之間相互作用是其發揮生物學功能的主要模式，蛋白質會通過結合不同的伙伴來行駛不同的功能，形成復雜的信號轉導網絡。常見的蛋白互作研究方法主要有：免疫共沉淀（Co-IP）、pull down、酵母雙雜交、熒光雙分子互補（BiFC）、熒光共定位等。這些方法相互補充，通過多種方法共同驗證蛋白質間的相互作用，能更大程度的避免假陽性結果。
Co-IP技術采用抗體捕獲樣本中的目標蛋白及其互作蛋白復合物，反應的是體內真實的生理結合，但不能顯示這些相互作用是直接還是間接的；另外合適的免疫共沉淀抗體是決定實驗成功的關鍵，有些蛋白沒有合適的IP抗體，無法進行內源性Co-IP實驗；通過構建帶標簽的表達載體，使目標蛋白與標簽融合表達，再借助標簽抗體即可完成Co-IP實驗，但需要注意合適的轉基因方法又是影響該方法成功的關鍵。
pull down技術將目標蛋白進行體外原核表達，使標簽蛋白（GST或His等）與目標蛋白融合表達，借助標簽的親和介質將目標蛋白純化出來，可以不受抗體、物種限制，比較輕松的獲得目標蛋白的結合蛋白，還可以通過外源同時表達目標蛋白和待測蛋白，確定它們是否發生直接的相互作用，但該方法無法得知體內真實的結合情況。
酵母雙雜交技術是比較古老的一種技術，將目標蛋白和待測蛋白與GAL4
的兩個結構域BD和AD融合表達，在酵母細胞中，2個蛋白的結合使得BD和AD在空間上靠近，從而激活報告基因lacZ的表達。但是由于受試蛋白都需要和
AD/BD 結構域形成融合蛋白，空間構象可能改變；另外假陽性率也比較高。
熒光雙分子互補（BiFC）技術將目標蛋白和待測蛋白分別與GFP的兩個片段融合表達，轉染細胞后，2個蛋白的結合使得GFP兩個片段空間上靠近，從而發出綠色熒光，該技術觀測直觀，操作簡便，但空間分辨率大約
250nm，對于蛋白質相互作用來說依然是個相當遠的距離，因此位置上靠近但并未結合的蛋白也可能顯示陽性結果，假陽性率較高；另外該技術可以驗證蛋白間的相互作用，但不能篩選未知互作蛋白。
熒光共定位技術依靠熒光確定蛋白質具有相同定位，用于輔助證明而非直接證明細胞內蛋白間的相互作用。
免疫共沉淀Co-IP * 輝駿服務內容
服務項目
| 服務內容 | 結果交付 | 實驗周期 | 客戶提供
| 價格
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Co-IP WB （驗證型） | 樣本質檢 （Western blot檢測誘餌蛋白和待測蛋白） | 樣本的誘餌蛋白Western blot檢測圖 樣本的待測蛋白Western blot檢測圖 | 3-4周 | 實驗樣本 誘餌蛋白的IP級抗體 待測蛋白抗體 實驗信息表 |
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Co-IP調取誘餌蛋白及其互作蛋白 （2組：實驗組、對照組） | IP產物的誘餌蛋白Western blot檢測圖
IP產物的待測蛋白Western blot檢測圖 CoIP實驗報告 |
Co-IP MS （篩選型） | 樣本質檢（Western blot檢測誘餌蛋白） | 樣本的誘餌蛋白Western blot檢測圖 | 5-6周 | 實驗樣本 誘餌蛋白的IP級抗體 實驗信息表 |
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Co-IP調取誘餌蛋白及其互作蛋白 （2組：實驗組、對照組） | IP產物的誘餌蛋白Western blot檢測圖
CoIP實驗服務報告 |
| IP產物的質譜檢測及數據分析 | 質譜（LC-MS/MS）檢測結果及報告 互作蛋白篩選表格 生物信息學分析結果和報告 |
免疫共沉淀CoIP * 樣本要求
樣本類型
| COIP-WB 建議送樣量 | COIP-MS 建議送樣量 |
| 動物細胞 | 3*10e7個細胞/組（約3個10cm皿） | 5*10e7個細胞/組（約5個10cm皿） |
| 動物組織 | 1g/組 | 2g/組 |
| 植物葉片 | 2g/組 | 4g/組 |
| 植物根或果實 | 4g/組
| 8g/組 |
| 菌體 | 50ul菌體沉淀/組 | 100ul菌體沉淀/組 |
▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南可聯系輝駿生物客服或銷售索取。
保存及運輸：-80℃保存，干冰取樣/運輸，至少在送樣前2天通知我司。
免疫共沉淀Co-IP * 結果示例
Co-IP WB：誘餌蛋白和待測蛋白Western blot檢測圖（陽性）
Co-IP MS：誘餌蛋白Western blot檢測圖
Co-IP MS：質譜檢索表格（部分展示）
Co-IP MS：互作蛋白生信分析結果（部分展示）
免疫共沉淀（Co-IP）服務案例—客戶文章解析
Jiang S.Y. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research. 2019. (中科院1區，IF=13.312).
膽固醇通過APMAP抑制EGFR降解誘導前列腺癌細胞轉移
研究概述
轉移性前列腺癌具有很高的致命性。已有報道表明，膽固醇與前列腺癌的發展有關；前期研究發現，膽固醇可以誘導前列腺癌細胞發生上皮-間質轉化（EMT），但其作用及潛在機制尚不清楚。本研究證明膽固醇介導APMAP上調，APMAP通過與EGFR競爭結合EPS15R，進而抑制EGFR降解，激活ERK1/2通路，促進前列腺癌細胞EMT；提出APMAP可能是一種關鍵的調節劑，為高脂肪飲食、肥胖和癌癥轉移之間提供了聯系。
研究路線
細胞功能實驗證實膽醇誘導前列腺癌細胞EMT的發生依賴于ERK1/2的激活RNA-seq、蛋白組學等實驗篩選和驗證與膽固醇有關的差異基因和蛋白，確定ERK1/2的上游凋節因子“ APMAI和“"EGFR”作為后續研究目標APMAP基因敵除后的RNA-seq結果及其細胞實驗均顯示APMAP和膽固醇可能有相似的功能APMAP和EGFR的表達關系實驗表明 APMAP通過調節EGFR參與膽固醇誘導的EMT過程免疫共沉淀Co-IP結合質譜實驗找到 APMAP的互作蛋白EPS15R免疫熒光結果顯示膽固醇誘導使EPS15R和APMAP的作用增強，EPS15R與EGFR解離,進而抑制EGFR降解
免疫共沉淀（Co-IP） * 客戶文章
實驗熱線：4006991663
