慢病毒包裝實驗原理
慢病毒（Lentivirus）是以人類免疫缺陷型病毒（HIV）為基礎發(fā)展起來的基因工具，已剔除毒性基因，屬于假型病毒，安全性高；它能同時感染分裂細胞和非分裂細胞，可將攜帶的外源基因整合到細胞基因組中實現(xiàn)基因的高效表達。
慢病毒包裝系統(tǒng)由三部分組成：
1. 含有外源基因片段、外源基因的啟動子，以及其它病毒包裝、整合所需的順式作用元件，如HIV-1 的5’LTR 和 3’LTR以及其他輔助元件等。
2. 包裝質粒：共2或3個，分別表達產生病毒包裝所必需的蛋白質（反式作用元件）。
3. 包裝細胞：293T 細胞株，能夠在慢病毒載體和包裝質粒mix 共轉染后包裝出慢病毒。
攜帶外源基因的慢病毒載體與包裝質粒共轉染293T包裝細胞，一段時間后收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，經濃縮和純化的慢病毒液可以用于感染宿主細胞或活體動物。
慢病毒包裝實驗服務流程
慢病毒包裝技術優(yōu)勢
① 慢病毒為整合型病毒，可實現(xiàn)外源基因或shRNA、miRNA穩(wěn)定、持久的表達，更適合于基因功能研究
② 更高的轉導效率，可以高效的表達外源基因。
③ 慢病毒感染率高，適用范圍廣（可感染分裂細胞和非分裂細胞），特別適合于質粒轉染效率低的細胞。
④ 包裝流程簡便，可以一次性獲得大量病毒且滴度高。
慢病毒包裝服務信息
輝駿生物提供的慢病毒包裝服務主要分為以下三種：
| 慢病毒包裝服務 |
| 服務項目 | 服務內容
| 結果交付 | 實驗周期 | 客戶提供 |
表達慢病毒包裝
| 表達慢病毒包裝
| 載體質粒、甘油菌、測序結果和報告 | 2-3周 | 實驗信息表（相關基因信息、載體要求、病毒量要求） |
包裝基因表達慢病毒
| 基因表達慢病毒液和對照慢病毒液 | 3-4周 |
| 檢測慢病毒滴度 | 滴度檢測報告 |
| shRNA慢病毒包裝 | 采用客戶提供的shRNA或siRNA序列構建shRNA慢病毒載體 | 載體質粒、甘油菌、測序結果和報告 | 2周
| 實驗信息表（相關基因信息、載體要求、病毒量要求） |
| 包裝shRNA慢病毒 | shRNA慢病毒液和對照慢病毒液 | 3-4周 |
| 檢測慢病毒滴度 | 滴度檢測報告 |
| 3+1 shRNA慢病毒包裝 | 針對基因序列設計并構建3個shRNA慢病毒載體
| 載體質粒、甘油菌、測序結果和報告 | 2-3周 | 實驗信息表（相關基因信息、載體要求、病毒量要求） |
| shRNA質粒轉染293T細胞進行干擾效率檢測 | 干擾效率檢測結果和報告 | 2周 |
干擾效率最高的shRNA質粒包裝慢病毒
| shRNA慢病毒液和對照慢病毒液 | 3-4周 |
| 檢測慢病毒滴度 | 滴度檢測報告 |
慢病毒包裝結果示例
慢病毒包裝滴度檢測圖
慢病毒包裝實驗服務*輝駿優(yōu)勢
十年服務經驗，客戶成果發(fā)表在NatureMethods，Oncogene，Cell Research等高水平期刊上。
自有分子及細胞生物實驗平臺，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線。
售后技術支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確保客戶安心進行下游實驗及投稿。
慢病毒包裝實驗服務-客戶文章
【研究內容】：研發(fā)發(fā)現(xiàn)CD151在結直腸癌(colorectal cancer, CRC)組織中表達較高，能促進癌細胞增殖、遷移和侵襲。RNA-seq和CoIP-MS實驗同時檢測和篩選了受CD151表達影響且與CD151相互作用的蛋白質，發(fā)現(xiàn)了3個蛋白——TGFβ1，CEACAM6和LGR5。pull down和免疫熒光實驗確定了它們間的相互作用。基因沉默和回復實驗進一步表明，CD151可能通過TGFβ1來促進CEACAM6、LGR5和Wnt通路。
使用技術：shRNA慢病毒載體構建、慢病毒包裝、穩(wěn)轉細胞株構建
【研究內容】：本研究發(fā)現(xiàn)肝癌組織和細胞中MafF（一種轉錄因子）的表達較低。慢病毒介導的MafF過表達抑制HCC細胞增殖并誘導細胞凋亡。生物信息學分析和熒光素酶實驗確定了MafF是miR-224-5p的直接靶點。RNA pull down實驗表明，circ-ITCH可作為miR-224-5p海綿發(fā)揮作用。基因表達/回復實驗進一步闡明，MafF的表達和抗腫瘤作用可通過circ-ITCH/miR-224-5p軸調節(jié)。本研究證實了MafF在HCC中的抑癌作用，揭示了MafF的上游調控機制，為HCC的潛在治療靶點提供了新的視角。
使用技術：過表達慢病毒載體構建、慢病毒包裝、穩(wěn)轉細胞株構建
【研究內容】：酪胺受體（TAR）可被酪胺（TA）或章魚胺（OA）激活，并已被證明與多種昆蟲的生理調節(jié)（如味覺反應、社會組織和學習行為）有關。作者在小菜蛾中新克隆得到一個酪胺受體基因Pxtar1，并在293T細胞中利用慢病毒進行了該基因的穩(wěn)定表達，功能實驗也顯示酪胺可以激活PxTAR1受體，此外，作者還調查了Pxtar1在小菜蛾體內的表達模式。
使用技術：過表達慢病毒載體構建檢測、慢病毒包裝技術服務、穩(wěn)轉細胞株構建實驗
【研究內容】：本研究發(fā)現(xiàn)FAM3B在人食管鱗狀細胞癌（ESCC）組織中高表達，且與患者不良預后有相關性。慢病毒介導的FAM3B過表達抑制ESCC細胞凋亡，促進ESCC細胞遷移和侵襲。進一步研究證實，F(xiàn)AM3B調節(jié)AKT-MDM2-p53通路和EMT的兩個核心標記物Snail和E-鈣粘蛋白。這些發(fā)現(xiàn)提示FAM3B可能是ESCC的一個有希望的分子靶點和診斷標記物。
使用技術：慢病毒載體構建技術、慢病毒包裝外包服務、穩(wěn)轉細胞株構建實驗
【研究內容】：作者發(fā)現(xiàn)FEN1在肺癌細胞中高表達，在維持基因組穩(wěn)定性方面發(fā)揮重要作用。慢病毒介導的基因表達實驗發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)EN1對肺癌細胞增殖來說很關鍵，抑制FEN1會導致DNA復制能力下降和DNA損傷積累，最終引發(fā)凋亡。FEN1水平改變還會影響肺癌細胞對化療藥物的響應。小鼠實驗也表明FEN1抑制劑的使用能夠阻礙肺癌發(fā)展。因此，該研究指出FEN1的有效利用可能會為肺癌靶向治療提供幫助。
使用技術：慢病毒載體構建、慢病毒包裝
【研究內容】：FEN1是一種含特殊結構的核酸酶，對維持人基因組的穩(wěn)定性中有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)了與直腸癌相關的新FEN1突變，L209P。該突變缺乏FEN1的側翼內切酶活性、外切酶活性及缺口內切酶活性，但保留了DNA結合特性。體內和體外的基因表達實驗表明，L209P突變能干擾野生型FEN1的功能，且對基因損傷更敏感，從而導致細胞內基因組的不穩(wěn)定和細胞轉化。
使用技術：慢病毒載體構建技術、慢病毒包裝實驗、穩(wěn)轉細胞株構建實驗檢測
輝駿實力
實驗熱線：4006991663
