在COIP實驗中,磁珠結塊是一個令科研人員頗為頭疼的問題,不僅會影響蛋白結合效率,導致實驗結果重復性差,還可能使大量時間和精力付諸東流。輝駿生物在本文將深入剖析磁珠結塊的原因,并提供切實可行的解決辦法與預防技巧,助力您的COIP實驗順利進行。

▲磁珠結塊的常見原因
1. 保存不當:磁珠在 4℃環境下放置時間過長且未充分混勻,或者經歷反復凍融,都會破壞其表面活性,增加結塊風險。
2. 孵育溫度失控:當磁珠在室溫下放置超過 30 分鐘,容易出現抱團現象,進而形成結塊。
3. 緩沖液 pH 異常:裂解液的 pH 值偏酸或偏堿,會導致磁珠表面電荷紊亂,促使磁珠相互聚集結塊。
★ 快速解決辦法
A. 冰浴超聲法:將磁珠懸液置于冰上,使用 20% 功率的超聲處理 3 秒,間隔 10 秒后重復操作 3 次。操作時需用封口膜密封離心管,防止液體濺出。此方法能有效分散結塊,讓磁珠恢復良好狀態。
B. 梯度混勻法:先以 500rpm 的轉速離心 10 秒,使磁珠沉底,再用 1ml 槍頭沿著管壁緩慢吹打 30 次,隨后用渦旋儀低檔震蕩 3 秒。全程需在冰上進行,避免溫度對磁珠產生影響。
C. 緩沖液調節法:若結塊是由緩沖液 pH 問題引起,可補加 50μl 1M Tris-HCl(pH8.0),輕輕混勻后靜置 5 分鐘,結塊會逐漸軟化并分散。
● 預防磁珠結塊的關鍵技巧
1) 磁珠從冰箱取出后,先在手心搓 10 秒回溫,再渦旋 1 分鐘,使磁珠均勻分散。
2) 每次取用磁珠前,必須上下顛倒離心管 50 次,直至肉眼看不到顆粒,確保磁珠充分混勻。
3) 加樣后,將樣品置于 4℃搖床,以 80rpm 的低速搖晃,避免劇烈震蕩對磁珠造成損傷。
在應對磁珠結塊問題時,選擇一款性能優良的磁珠產品至關重要。輝駿生物的ChainFree?納米抗體磁珠就是不錯的選擇,其表面采用特殊納米涂層處理,電荷分布穩定,能大幅降低結塊概率。即便偶爾操作時未及時混勻,也不易形成硬疙瘩,對新手非常友好。
輝駿生物ChainFree? 納米抗體磁珠在 COIP 實驗中表現卓越,磁珠粒徑均勻,確保實驗結果的均一性與穩定性,能夠精準地富集目標蛋白 - 蛋白復合物,減少非特異性結合,讓 WB 條帶更清晰。同時,在蛋白質純化領域,可高效分離出高純度的目標蛋白,滿足科研及生物制藥等多方面需求。

●Western-Blot結果顯示:輝駿生物ChainFree?磁珠對誘餌蛋白的親和力強,IP效果與sigma產品相當,且遠高于同類知名品牌磁珠。
●SDS-PAGE結果顯示:輝駿生物ChainFree?磁珠的IP復合物中無抗體輕重鏈污染,并且同等使用體積時拉取到的誘餌蛋白和互作蛋白量更高,更有利于后續質譜檢測需求。
Tips:雖然采用偶聯HRP的anti-flag抗體或輕重鏈特異性二抗做WB實驗可以掩蓋輕重鏈干擾問題,但IP復合物中的輕重鏈污染依舊存在,且會對質譜檢測造成影響。

泳道1:轉染Flag空載體的HEK-293T細胞裂解液
泳道2:轉染Flag-誘餌蛋白的HEK-293T細胞裂解液
泳道3:轉染Flag空載體的HEK-293T細胞裂解液采用20 μL ChainFree? Anti-Flag 磁珠IP后的洗脫液
泳道4:轉染Flag-誘餌蛋白的HEK-293T細胞裂解液采用20 μL ChainFree? Anti-Flag 磁珠IP后的洗脫液
一抗:Anti-Flag小鼠單克隆抗體1:2500稀釋(輝駿產品貨號:FI01104)
二抗:羊抗鼠IgG (H+L) :1:8000稀釋
預計分子量大小:55 kDa
使用輝駿生物的納米抗體磁珠,再結合上述的操作技巧,能有效避免磁珠結塊,保證實驗的順利進行,讓 WB 條帶更加清晰干凈。此外,我們還提供納米抗體磁珠試用裝,便于新手先進行嘗試。
如果您正在為CoIP實驗中的磁珠結塊問題煩惱,不妨嘗試上述方法并選用輝駿生物的ChainFree? 納米抗體磁珠,相信能為您的實驗帶來很大幫助。

● ChainFree? Anti-Flag Magnetic Beads(FI8201)
● ChainFree? Anti-HA Magnetic Beads(FI8202)
● ChainFree? Anti-V5 Magnetic Beads(FI8203)
● ChainFree? Anti-Myc Magnetic Beads(FI8204)
● ChainFree? Anti-GFP Magnetic Beads(FI8205)
● ChainFree? Anti-RFP Magnetic Beads(FI8206)

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